科技日报记者 龙跃梅 通讯员 陈淑华
“这里是与病毒‘零距离’接触的地方，整个实验室完全密封，室内处于负压状态，我们喜欢用‘三流’来形容它，即人流、物流、气流的单向流动，确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。”广东省第二人民医院P3实验室主任林剑国说，“这里”指的就是P3实验室。广东省第二人民医院每天400多份新冠肺炎核酸检测就是在这里开展的。
现在，我们一起来揭开广东省第二人民医院P3实验室的神秘面纱，看看病毒究竟在P3实验室是怎样被“揪出来”的？
揭秘一：前世今生
P3实验室是生物安全防护三级实验室，P是Protection的缩写。整个实验室完全密封，室内处于负压状态，从而使实验室内部的气体不会泄漏到外面而造成污染，也就是“气流”的单向流动。实验室生物安全防护实验室是指实验室的结构和设施、安全操作规程、安全设备能够确保工作人员在处理含有致病微生物及其毒素时，不受实验对象侵染，周围环境不受污染。
根据微生物及其毒素的危害程度不同，分为四级，一级最低，四级最高。广东省第二人民医院新冠病毒核酸检测就是在P3实验室进行的。
揭秘二：抽丝剥茧
核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”，而检测流程中的每一个环节都是精细活，容不得半点马虎。在操作中，实验员面对眼前的样本，需要“一个一个地揭开盖子，开盖加样和核酸提取”，这无疑是与“病毒”正面交锋，现在来看省二医的实验员是如何一一过招。
实验室内的检测流程可分为5个步骤：样本进入“传递窗”——灭活处理——开盖加样和核心提取——扩增反应判断结果——高压灭菌。
第一步，样本进入实验室也有讲究——“传递窗”隔离空气。
采集的检测样本如咽拭子或肛拭子，在进入P3实验室前就得先进入一个特殊的窗口——“传递窗”，这个窗口也叫Air Lock，空气锁。顾名思义，与空气有关，这个传递窗有不能同时打开的双重门，保证传递样本时带进去的空气被隔离在双重门中，保证实验室外的环境不受污染。这也是“三流”中“物流”，样本的命运起点，在这里开启它在实验室中短暂的一生。
第二步，检测前的灭活处理——不一定但相对的安全。
标本处理间，在这里进行开盖加样和核酸提取。
样本在水浴箱经半个小时56℃高温灭活，这样会使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在对样本进行检测时相对安全，但是病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。
第三步，检测的核心环节——进行开盖加样和核酸提取。
通过核酸扩增仪进行扩增反应。
第四步，扩增反应——45个循环绘制荧光曲线判断结果。
提取的核酸送到核酸检测室内，就要上仪器了。提取的核酸加入扩增试剂中，通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应，先将提取的核酸逆转录成DNA，再以DNA为模版，对特定位点进行扩增，利用不同的温度进行变性、退火和延伸，每个循环采集荧光值，45个循环后绘制荧光曲线，用时约110分钟，实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性和阳性。
第五步，污染物的高压灭菌处理。
实验过程产生的污物通过高压灭菌后，按相关普通医疗垃圾处理。“物流”的终点在这里就结束了。
产生的污物通过高压灭菌后，按相关医疗垃圾处理
揭秘三：倾柯卫足
“三流”中的“人流”又是什么？来看看工作人员是如何工作的。
首先在清洁区内穿戴中级防护服——通过缓冲间进入到实验室内负压工作间，在这里进行标本处理，核酸提取及检测——完毕后进行空间、表面消毒，按顺序脱下防护服——通过淋浴间更衣后，回到清洁区。这些步骤一个都不能少！
核酸检测的主要宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是工作人员的安全。到目前为止，P3实验室未出现过生物安全问题，当然也与平时训练有关。
揭秘四：弃伪存真
任何一个环节都不能忽视，任何一个环节出现问题都可能导致“假阴性”或“假阳性”。因此，为保障检测的质量，检测结果将经历重重的比对与复核。
据介绍，检测质量的保障措施在检测前就已经开始了，样本采集的医务人员必须经过严格的培训和考核才能上岗，样本的质量与采集的技术密切相关，每一帧动作流程都必须按规定进行，样本采集完后的护送工作都需按照严密的程序，由专人专道配送到实验室。
在检测过程中，实验员保持始终如一的谨慎态度进行每一次测试，不错过任何一个可疑样本，针对可疑样本，选用不同的试剂进行复核确定，以防止“假阴性”的出现；其次，每进行一批实验，均会随机插入三个以上空白对照，针对阳性样本会进行病毒基因的测序比对，以防止“假阳性”的出现。
检测后，定期随机抽取检测后的样本送第三方实验室进行检测，对数据进行对比分析，同时也参加卫生主管部门和广东省临床中心的室间质评，保障检测的准确性。
揭秘五：所向披靡
P3检测团队目前有21人，实行一天三班制。在疫情非常时期，为了满足检测需求，缩短检测时间，在原有团队基础上，从风湿免疫科、血液科等科室实验室调配增加人员。“侦察兵”的检测团队70%以上是硕士以上学历，均经过分子生物学的培训和拥有PCR上岗证。
誉为“侦察兵”的检测团队。
P3实验室主任林剑国，2002年获得华中科技大学传染病学专业医学博士，分别在美国疾控中心、Emory大学、Saint Louis 大学从事病毒发病机制及疫苗研制等方面工作达14年，在高致病性病毒的处理及生物安全方面积累了丰富的经验。
实验室严格遵照“新型冠状病毒肺炎诊疗方案”及生物安全要求，检测人员需在P3实验室负压密闭的空间里穿着三级防护装备，5个小时不吃不喝，甚至穿戴成人纸尿裤以解决上厕所的需要，随时需要面对和克服因负压差及严密装备导致出现的头晕、呕吐等症状。
“他们与战斗在病房里的医护人员不同，他们藏在实验室里，每天与病毒近距离接触，是别人看不见的‘最前线’。”广东省第二人民医院P3主任林剑国说。
